Изучение антигенных свойств рекомбинантного аналога белка NEF вируса иммунодефицита человека

Белок р27/р25 - продукт гена nef вируса иммунодефицита человека - многофункциональный фактор патогенности ВИЧ. Антигенные свойства рекомбинантного полипептида NEF, содержащего слитный с ß-галактозидазой E. coli N-концевой фрагмент белка р27 ВИЧ-1, исследованы с применением серологических и вирусологических методов. Методами ИФЛ, Вестерн-блоттинга и линейного иммуноаналаза показано взаимодействие рекомбинантного антигена NEF и сывороток крови ВИЧ-инфицированных пациентов и отсутствие положительных реакций с сыворотками крови здоровых людей. Лнтигенная специфичность рекомбинантного антигена подтверждена в реакциях с коммерческим аналогом белка р27/р25 ВИЧ-1 и с поликлональными антителами к синтетическим пептидам, соответствующим N- и С-концевым участкам белка р27/р25 ВИЧ-1. Показано взаимодействие IgG кроликов, иммунизированных рекомбинантным антигеном NEF, с вирусными антигенами в реакциях непрямой иммунофлуоресценции и нейтрализации. Таким образом, экспериментально обоснована возможность применения рекомбинантного белка NEF в качестве антигена в диагностических и исследовательских целях.

вирус иммунодефицита человека , ВИЧ-1 , ген nef , рекомбинантный антиген NEF , иммуноферментный анализ , Вестерн-блоттинг , линейный иммуноанализ , метод непрямой иммунофлуоресценции , реакция нейтрализации , Human Immunodeficiency Virus , HIV-1, nef gene, glycoprotein G , recombinant NEF antigen , enzyme immunoassay , Western blot , line immunoassay , indirect immunofluorescence , neutralizing assay

1. Методическое письмо № 4174-РХ от 04.08.2006 г. Проведение лабораторного обследования на ВИЧ-инфекцию (в том числе исследование иммунитета и вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции): 1 - 19.

2. Kim S.Y., Byrn R., Groopman J., Baltimore D. Temporal aspects of DNA and RNA synthesis during human immunodeficiency virus infection: Evidence for differential gene expression. J. Virol. 1989. 63: 3708 - 3713.

3. Pandori M.W., Fitch N.J., Craig H.M. Richman D.D., Spina C.A., Guatelli J.C. Producer-cell modification of human immunodeficiency virus type 1: Nef is a virion protein. J. Virol. 1996. 70: 4283 - 4290.

4. Wieland U., K hn J.E., Jassoy C., R bsamen-Waigmann H., Wolber V., Braun R. Antibodies to recombinant HIV-1 NEF, tat, and nef proteins in human sera Medical Microbiology and Immunology. 1990. 179. 1: 1 - 11.

5. O'Neil C., Lee D., Clewley G., Johnson M.A., Emery V.C. Prevalence of anti-NEF antibodies in HIV-1 infected individuals assessed using recombinant baculovirus expressed NEF protein. J. Med. Virol. 1997: 139 - 44.

6. Frahma N., Lindea C., Brander C. Identi cation of HIV-Derived, HLA Class I Restricted CTL Epitopes: Insights into TCR Repertoire, CTL Escape and Viral Fitness. HIV Molecular Immunology. 2006: 3 - 28.

7. Алаторцева Г.И., Нестеренко Л.Н., Волынская Е.А., Амиантова И.И., Кабаргина В.Ю., Жукина М.В. и др. Получение рекомбинантного полипептида, содержащего антигенные детерминанты белка nef ВИЧ-1 и его применение для диагностики ВИЧ-инфекции методом линейного иммуноблоттинга. Труды XI Международного конгресса «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии». Российский аллергологический журнал. 2011. 4 (1): 12 - 14.

8. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ. 1992. № 2043409 на изобретение «Штамм бактерий Escherichia coli, используемый для получения рекомбинантных белков».

9. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ.1992. № 2071501 на изобретение «Вектор pEL5a, предназначенный для экспрессии чужеродной ДНК».

10. Новое в клонировании ДНК. Методы. Ред. Гловер Д., Москва, 1989: 122 - 128.

11. Sameh Magdeldin and Annette Moser. Affinity Cromatography: Principles and Applications, Affinity Chromatography. Ed.: S. Magdeldin. In Tech. 2012: 70 - 75.

12. Virca G.D., Travis J., Hall P.K., Roberts R.C. Purification of -2-Macroglobulin by Chromatography on Cibacron Blue Sepharose. Analytical Biochemistry. 1978. 8: 274 - 276.

13. Rattana Wongchuphan, Beng Ti Tey, Wen Siang Tan, Senthil Kumar Subramanian, Farah Saleena Taip, Tau Chuan Ling. Purification of rabbit polyclonal immunoglobulin G using anion exchangers. Process Biochemistry 2011. 46: 101 - 107.

14. Практическая химия белка. А. Дарбре, ред. Пер. с англ. Москва. 1989: 1 - 621.

15. Towbin H., Staehlin T., Gordon Y. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Proce-dure and some applications. Proc. nat. Acad. Sci. USA. 1979; 76: 4350 - 4359.

16. Носик М.Н., Рыжов К.А., Киселева И.А., Кравченко А.В., Покровский В.В. Биологические свойства штаммов вируса иммунодефицита человека, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц на территории России за 2009-2010 гг. ЗНиСО. 2011; 4 (217): 31 - 34.

17. End point neutralization assay. WHO Guidelines for Standart HIV Isolation Procedures 1994, 1998 update.

18. McCoy L.E., Weiss R.A. Neutralizing antibodies to HIV-1 induced by immunization. J. Exp. Med. 2013; 210 (2): 209 - 223.

19. Pleguezuelos O., Stoloff G.A., Caparr s-Wanderley W. Synthetic immunotherapy induces HIV virus specific Th1 cytotoxic response and death of an HIV-1 infected human cell line through classic complement activation. Virology Journal. 2013; 10: 107 - 120.

20. Chen Y.M., Lin R.H., Lee C.M., Fu C.Y., Chen S.C., Syu W.J. Decreasing levels of anti-Nef antibody correlate with increasing HIV type 1 viral loads and AIDS disease progression. AIDS Res. Hum Retroviruses. 1999; 15 (1): 43 - 50.

21. Duri K., M ller F., Gumbo F.Z., Kurewa N.E., Rusakaniko S., Chirenje M.Z. et al. Human immunodeficiency virus (HIV) types Western blot (WB) band profiles as potential surrogate markers of HIV disease progression and predictors of vertical transmission in a cohort of infected but antiretroviral therapy na ve pregnant women in Harare, Zimbabwe. BMC Infect. Dis. 2011; 11: 7.

22. Opendra Narayan, Zhenqian Liu. HIV DNA vaccine imposition and methods of use. Patent USA. 2011. № 8,003,113 B2.